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    奶牛性別鑒定與性別控製

     

    奶牛生產(chǎn)的主要目的是產(chǎn)出更多的(de)牛奶供人(rén)們生活所需。而奶牛繁殖是以產出更(gèng)多母犢為主要目的。故(gù)奶牛生產中的性別鑒定和性別控製(zhì)顯得尤為重(chóng)要。
    一、性別控製技術對奶牛生產的意義
    性別(bié)控製
    是指通過人為幹涉動物正常的生(shēng)殖過程,使雌性動物按人的意(yì)願生出所需性(xìng)別後代的一種繁殖技術。其對奶牛生產有重要意(yì)義:
    1)充分(fèn)發揮動物的生(shēng)產(chǎn)潛(qián)能,產出更多母(mǔ)犢。
    2)克服(fú)異性孿生不育。
    3)去除不利(lì)的陰性基因,防止性連鎖疾病。
    二、精子的性別分離
    哺乳動物精子類型包括x精子和Y精子。兩類精子在比重(chóng)、體積、表麵電荷(hé)、表麵抗原等方麵略有差異。據此可通過沉降法、離心法、過濾法、電泳法(fǎ)、H—Y抗原法等方(fāng)法分離(lí)這兩類精(jīng)子,以期達到控製後代性別的目(mù)的。理(lǐ)論(lùn)上講這是控製性別最經濟、最有效的方法。然而迄今為止,這些方法在一些實(shí)驗中雖曾得到較滿意的結果,使某一性別的後代明顯地(dì)多於另一性別,但這隻在一定程度上改變了後代出生的性別比例,並沒有超出自然出現的性別比例範圍。
    近年,細胞流式分類(lèi)器在分離兩類精子上顯示出較大的優勢。用無毒性的(de)活體染料將(jiāng)精子(zǐ)染(rǎn)色,染色的活精子逐個通過細胞(bāo)分類器的微柱。此時,用一束激光激發熒光染(rǎn)料(liào),使通(tōng)過(guò)微柱的精子(zǐ)發光。因X精子DNA含量(liàng)略高於Y精子(A:2.5%-4.5%),故x精子發光量略高於Y精子。這種發光亮的微小差別(bié)由光學測定儀記錄並把信(xìn)號送給電腦。精液通過激(jī)光束後,便被分成微滴。電腦把電子信息反(fǎn)饋到產生微滴的部(bù)位,使每個微滴帶電。x精子帶正電,Y精子帶負電。當帶電(diàn)精子(zǐ)進入電場後,兩類精子便分別(bié)向不同(tóng)的方(fāng)向移動,進入不同的容器(qì)。分離後的部分精子未受損傷,可用於(yú)受精。
    細胞流式分類器目前還不可能進(jìn)入實用階段,一方麵是由於分(fèn)離精子(zǐ)的速度很慢,每小時(shí)隻能分(fèn)離35萬個精子。另一方麵,這種儀器價格昂貴,一(yī)般的生(shēng)產單位無力支付如此高的費用。
    三、早期(qī)胚胎性別鑒定
    (
    ) 細胞遺傳學法
    通過核(hé)型分析來完成胚胎性別鑒定,最早用於兔、羊、牛。先取少量的胚胎細胞,在(zài)含有秋水仙素的培(péi)養液中培(péi)養,由於秋水仙素的阻抑作用使細胞的(de)有絲(sī)分裂停留在中期,在滲透壓的作用下使細胞膨脹,細胞壁破裂,染色(sè)體被釋放,然後經固定和姬姆薩染色後在顯微鏡下觀察。由於有絲分裂被阻滯在中期,故染色體縮短,形狀規則,並(bìng)有特異的帶型,通過核型分析,確定其性(xìng)染色體類型屬XX還是XY型,這種方法鑒定胚胎性別的準確率幾乎是100%,但操作過程比較煩瑣(suǒ)。
    (
    二(èr)) X染色(sè)體連接酶活力測(cè)定法
    哺乳動物性染色體的類型,雌性為XX而雄性為XY型,為了維持性別之間的基因平衡,在胚胎發育的早期,雌性個體每個細胞中(zhōng)的(de)一條x染色體是失活的(de),盡管這條(tiáo)x染色體失活的確切時間尚不知道,但可以肯定的是在這條染色體(tǐ)失活前有一段時間,兩條X染色體均有活性,並進行轉錄,這(zhè)表現在胚胎發育的早期,雌性胚胎(tāi)x染色體連鎖酶的活性是雄性胚胎的(de)兩倍。依據這一事實,WilliamsMonk等檢測了小鼠桑椹胚至囊(náng)胚期這段時間X染色體連鎖酶的活性,即葡萄糖-6—磷酸脫氫酶(méi)的活性,以預測胚胎的(de)性別(bié),移植後分娩結果表明雌性、雄(xióng)性胚胎的準確率(lǜ)分別為72%、57%。這種方法鑒定胚胎的準確率較低(dī),主要(yào)原因是不知道X染色體(tǐ)失活的確切時間
    (
    ) H—Y抗原法
    目前利用H-y抗原進行(háng)胚胎性別鑒定的方法有兩種,即細(xì)胞毒性分析法和間接免疫熒光法。
    1.
    細胞毒性分(fèn)析法
    將胚胎培養在含有H-Y抗血清與補體(豚鼠血清)的培養液中進行培養,有H-Y抗原的胚胎表現出一定的細胞溶解,此類胚胎(tāi)被判(pàn)為雄性(xìng)胚胎(tāi)。能夠繼(jì)續發育即H-Y陰(yīn)性的胚胎移植後所生仔鼠有86%為雌性。該方(fāng)法以破壞雄性(xìng)胚胎為代價,故現已很少采用(yòng)。
    2
    .間接免疫熒光法
    先將8細胞至囊胚期胚(pēi)胎與H-y抗體反應30min,再(zài)與用異硫(liú)氰酸(suān)鹽熒(yíng)光素(FITC)標記(jì)的(de)免疫球蛋白M(IgM)抗體反(fǎn)應。然(rán)後在熒光顯微鏡下檢查胚胎是否帶有熒光素,若有熒光素則被判定為雄性。此法主要優點是不損害胚胎,準(zhǔn)確率比較高,豬、綿羊、牛雌(cí)性鑒定準確率分別可達81%、85%和89%。但該方法(fǎ)需要熒光顯微鏡和豐富(fù)的經驗。
    (
    ) Y染色體特異性DNA探針法
    應用這一方法必須經過複雜的(de)技術過程製備特異性的(de)、經同位素標記的Y染色體特異序列的探針,用這一探針與從胚胎細胞中提取出的少量DNA雜交,雜交結果(guǒ)呈陽性的說明有(yǒu)Y染色體,可判(pàn)為雄性。該方法準確率達90%。
    九十年代初,英(yīng)國學者發現了存在於(yú)Y染色體短臂上的、決定雄性的DNA片段,定名為SRY,即(jí)性別(bié)決定區(基因)。這一發現(xiàn)被認為是九十年代以來生物科學的(de)重大成(chéng)就之(zhī)一,為進一步開展性別控製研究奠定了基(jī)礎。將其(qí)與聚合酶鏈反應(PCR)擴增技術相結合,應用於胚胎性別鑒定,準確率可達100%;國內研究者已成功地用PCR技術直接擴增牛胚胎的SRY特異DNA序列,能夠(gòu)準確地鑒定牛胚胎的性別。
    四(sì)、出生前胎兒的(de)性別確定
    (一(yī)) 羊水成分分析法
    在出生前確定胚(pēi)胎性別是通過測定羊水中的激素含量,或分析性染色體,或用Y染色體特(tè)異性(xìng)DNA操針檢測從羊水中分離獲(huò)得的(de)細(xì)胞,以確定性別的方法。如果胎兒性別不是所需要的(de),則可實施流產。據報道(dào)從懷孕3040天的牛(niú)早期胚胎(tāi)活組織采樣,經染色體分析可以確定胎兒的性(xìng)別,但這種方法同樣要對不需要的胎(tāi)兒實施(shī)流產。
    (二) B超鑒(jiàn)定法
    根(gēn)據胎(tāi)兒性(xìng)別的形態學差異,可利用(yòng)B超確定胎兒性別。具體說,可根據胎兒的生殖結節(jiē)或陰囊與乳房進行性別判定。在胎兒分化過程中,生殖結節在雄性中由後腿間起始部(bù)位移向臍帶,在雌性則移向尾部。鑒別時應(yīng)仔細(xì)探查臍、後腿及尾區,確認(rèn)頭、搏(bó)動的心髒、臍帶等標記部位。最佳鑒別時間為妊娠後50 - 60d。鑒別可(kě)在生產條(tiáo)件下進行,然而需要相當豐富的經驗(yàn)。
    總之,影響性比的因素很複雜。通(tōng)過進一步研究,建立實用、穩定、準確的性(xìng)別控製方法,應用於奶牛生產,必將產生巨大(dà)的經(jīng)濟效益。

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